【微生物检验】链球菌属及其检验
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链球菌属(Streptococcus)细菌,呈链状排列的革兰阳性球菌,个别种成双排列。广泛分布于自然界、人及动物肠道和健康人鼻咽部,大多数不致病,致病菌可引起各种化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病。下面是yjbys小编为大家带来的关于链球菌属及其检验的知识,欢迎阅读。
⒈分类
链球菌的分类方法尚未统一。常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象:分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus):菌落周围有1~2mm宽的草绿色溶血环,称甲型溶血或α溶血,该类菌又称草绿色链球菌,为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus):菌落周围有2~4mm宽的透明溶血环,称乙型溶血或β溶血,该类菌又称溶血性链球菌,致病性强,常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus):菌落周围无溶血环,因而又称不溶血性链球菌,一般不致病。
⑵根据抗原结构:按链球菌细胞壁中多糖抗原不同,可分成A、B、C、D …等20个群。同群链球菌间,因表面蛋白质抗原不同又分若干型。如A群根据其M抗原不同,可分成约100个型;B群分4个型。对人致病的链球菌菌株,主要是 A群,多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性
⑴链球菌
① 形态染色 球形或椭圆形,直径0.5~1.0μm,链状排列,链的长短与细菌的种类和生长环境有关,在液体培养基中形成的链较长。无芽胞,无鞭毛。多数菌株在培养早期(2~4h)形成透明质酸的荚膜。革兰染色阳性。
②分离培养 营养要求较高,培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。多数菌株兼性厌氧,少数为专性厌氧。在液体培养基中呈沉淀生长,在血平板上,37℃18~24h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm~0.75mm的细小菌落,菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应 触酶阴性、一般不分解菊糖,不被胆汁溶解,这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
④抗原构造 主要有三种:
蛋白质抗原:或称表面抗原。具型特异性有M、T、R、S 4种,位于C抗原外层。与致病性有关的是M抗原。
多糖抗原:或称C抗原。为群特异性抗原,位于细胞壁。根据C抗原的不同,将链球菌分为20群。对人致病的90%属A群。
核蛋白抗原:或称P抗原。无特异性,为各种链球菌所共有,并与葡萄球菌有交叉。
⑤抵抗力 不强,60℃30min即被杀死。对常用消毒剂敏感。乙型链球菌对青霉素、红霉素、四环素及磺胺类敏感。
⑵ 肺炎链球菌
① 形态染色 革兰阳性球菌,菌体呈矛头状、成双排列,宽端相对,尖端向外,在脓液、痰液及肺组织病变中亦可呈短链状,无鞭毛,无芽胞,在机体内或含血清的培养基中可形成荚膜。
②分离培养 营养要求高,在血平板上形成灰白色、圆形、直径为0.5mm~1.0mm的扁平菌落,周围有草绿色溶血环。培养时间长时可产生自溶酶。
③生化反应 多数菌株分解菊糖,胆盐溶解试验阳性和optochin敏感试验阳性,籍此可与草绿色链球菌相区别。
④抗原结构
荚膜多糖抗原 可将肺炎链球菌分为85个血清型。肺炎链球菌14型与人类A血型抗原有交叉反应。
多糖抗原 为各型菌株所共有。可被血清中一种C反应蛋白(C reactive protein,CRP)所沉淀。正常人血清中只含微量CRP,急性炎症者含量增高,故常以测定CRP作为诊断的依据。 检验地带网
M蛋白:为型特异抗原,与A群链球菌M蛋白类似,但抗原性不同,与毒力无关。
⑤抵抗力 本菌抵抗力弱,对一般消毒剂敏感。有荚膜菌株抗干燥力较强,在干痰中可存活1~2月。对青霉素、红霉素、洁霉素敏感。
⑥ 变异性 有荚膜的肺炎链球菌经人工培养后可发生菌落由光滑型向粗糙型,即S-R变异,同时随着荚膜的消失,毒力亦随之减弱。将R型菌落的菌株接种动物或在血清肉汤中培养,则又可恢复S型。
⒊临床意义
⑴化脓性链球菌
A群链球菌也称化脓性链球菌(pyogenic streptococcus),致病力强,占人类链球菌感染的90%,能产生多种外毒素和侵袭性酶,如链球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、链激酶、链道酶、透明质酸酶等,可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎及变态反应性疾病如急性肾小球肾炎、风湿热等,产毒株还可引起猩红热。链球菌型别多,各型间无交叉免疫,故常反复感染。
⑵乳链球菌
B群链球菌学名无乳链球菌(actiae)是新生儿败血症和脑膜炎的常见菌,对成人主要引起肾盂肾炎、子宫内膜炎等。
⑶ 肺炎链球菌
肺炎链球菌(moniae),俗称肺炎球菌(pneumococcus),是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌,还可引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎等。其荚膜在细菌的侵袭力上有重要作用,此外溶血素、神经氨酸酶是主要致病物质。感染后机体可产生牢固的型特异性免疫。但因菌型多,可再感染其他型。 检验地带网
⑷ 草绿色链球菌
草绿色链球菌亦称甲型溶血性链球菌。是人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群,可引起亚急性细菌性心内膜炎。
⒋微生物学检验
⑴链球菌
检验程序
链球菌检验程序见图9-2。
⑵标本采集 根据不同疾病采集不同标本。
⑶检验方法
显微镜检查 标本涂片革兰染色,镜检见链状排列革兰阳性球菌可初报。
分离培养 血液标本先增菌培养,脓液、咽拭可接种血琼脂平板并涂片染色镜检,初代分离需5%C02,35℃24h观察菌落性状。
⑵肺炎链球菌
①检验程序
肺炎链球菌检验程序见图9-3。
②标本采集 根据病变部位采集不同标本。 检验地带网
③检验方法
显微镜检查: 除血液外,痰、脓液等均可直接涂片染色镜检。如发现革兰阳性矛头状双球菌,周围有较宽的透明区,经荚膜染色确认后可初报“找到肺炎链球菌”。
分离培养:血液、脑脊液先增菌,可呈均匀混浊,有绿色荧光。痰液、脓液可直接接种血平板,5%~10%CO2培养后,取可疑菌落进一步作optochin敏感实验、胆盐溶菌试验与菊糖发酵试验,以区别于甲型链球菌。
动物试验:小鼠对肺炎链球菌敏感,12~36h死亡。
荚膜肿胀试验:如遇同型免疫血清,则肺炎链球菌荚膜出现肿胀,为阳性。
④鉴定与鉴别
β溶血链球菌鉴定(表9-1)
①Lancefield群特异性抗原鉴定:B群为无乳链球菌,F群为米勒链球菌,A、C、G群抗原不是种特异性抗原,还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定。
②PYR试验:化脓性链球菌为阳性。
③杆菌肽(bacitracin)敏感试验:化脓性链球菌为阳性,有别于其他PYR阳性的β溶血性细菌(猪链球菌、海豚链球菌)和A群小菌落β溶血性链球菌(米勒链球菌)。此法可作为筛选试验。
④VP试验:可鉴别A、C、G群β溶血的大、小两种不同菌落。
⑤CAMP试验:无乳链球菌能产生CAMP因子,它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力,使其产生显著的协同溶血作用。试验时先将金黄色葡萄球菌(ATCC25923),沿直径划线接种,再沿该线垂直方向接种无乳链球菌,两线不得相接,间隔约3~4mm。35℃孵育过夜,两种划线交界处出现箭头状溶血,即为阳性反应。本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验。
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